جداسازی و همسانه سازی ژن سرطان بیضه developmental pluripotency associated-۲انسانی

ژن های سرطان بیضه (ctas) زیر گروهی از آنتی ژنهای مرتبط با تومور (taa) می باشند که در سلول های لایه زایا بیضه، تخمدان و تروفوبلاست و در انواع مختلفی از سلول های سرطانی بیان می شوند. عملکرد بیولوژیکی ژنهای ct در لایه زایا و تومورها تاکنون به درستی شناخته نشده است. یکی از مهمترین ctas، ژن سرطان بیضه 100 (ct100) می باشد که به نامdppa2 نیز شناخته می شود. هدف ما در این طرح جداسازی، تکثیر و همسانه سازی ژن dppa2 بوده است. بدین منظور در ابتدا رده های سلولی بیان کننده ژنdppa2 شناسایی شدند. سپس توسط پرایمرهای طراحی شده، در شرایط بهینه، واﻛﻨﺶ زﻧﺠﻴﺮه ای ﭘﻠﻴﻤﺮاز ﺑﺎ روﻧﻮﻳﺴﻲ ﻣﻌﻜـﻮس (rt-pcr) انجام گرفت. در ادامه ژن dppa2 از روی ژل آگارز استخراج، در وکتور ptz57r/t کلون، و سپس به میزبان (top10f') e.coli انتقال داده شد. در نهایت صحت کلنی های نوترکیب، توسط روش کلنی pcr، هضم آنزیمی و تعیین توالی مورد بررسی قرار گرفت. بر اساس نتایج حاصله، ژن dppa2 از رده سلولی skov3 جداسازی و تکثیر شد و پس از همسانه سازی در وکتور ptz57r/t، کلنی های نوترکیب توسط کلنی pcr، هضم آنزیمی و تعیین توالی مورد تایید قرار گرفتند. با توجه به اهمیت ژن dppa2 در روند ایجاد سرطان، شناسایی عملکرد این ژن سرطان بیضه دارای اهمیت بسزایی است که جداسازی و همسانه سازی این ژن را حائز اهمیت می سازد.